产品原理

        荷兰Confocal.nl的NL5（快速深度3D共聚焦显微镜）可安装在普通荧光显微镜的port上，为原显微镜增加一个共聚焦光路，与普通的点扫描共聚焦不同的是：NL5利用狭缝针孔（slit pinhole）而不是普通针孔（pinhole）建立共聚焦成像光路，狭缝的引入可以增强信号强度，它的激发光成“棒”状（bar）快速扫描样本，在检测器阵列的作用下可以实时线性成像（real time line imaging），可以极高速地进行深度3D共聚焦成像。NL5整合了狭缝针孔（slit pinhole）、前沿的数字化技术和采用极高灵敏度的sCMOS相机做检测器，成为了可以做快速、深度3D活细胞成像的共聚焦显微镜系统。

        常用的点扫描共聚焦速度有限，NL5利用狭缝针孔（slit pinhole）用线性扫描代替传统的点扫描达到极快的扫描速度：25fps，full frame。这样您的样本就不会在激光下暴露太长时间，避免了光漂白和光毒性。另外，高量子效率的现代化sCMOS相机的使用也使极低激光强度成为可能，因此可以得到在无光毒性和光漂白性的情况下得到高信噪比的图像，特别适合3D活细胞长时间成像，在给样本提供温和的生长环境的同时，得到高分辨率和高对比度的3D图像。

        对比转盘式共聚焦系统，NL5的另外的优势是：它的狭缝针孔（slit pinhole）使之在进行深度成像时不会引起针孔串扰（pinhole cross-talk）现象（转盘式共聚焦具有多个针孔，离焦平面足够远的杂散光会进入相邻的针孔，这一过程称为针孔串扰，样品越厚串扰影响越大）。NL5具有较高的分辨率：可以得到240nm的光学横向分辨率，实时去卷积后可以达到170nm。和RCM（超高分辨多重扫描共聚焦显微镜）一样，NL5可以搭配不同生产商的显微镜、相机和激光光源，将普通宽场荧光显微镜改造成快速深度3D共聚焦显微镜，还可以和RCM一起同时安装在普通荧光显微镜上，即使整套采购也具有极高的性价比。

产品特点

NL5的含义即：New Line、New Light、New Live，它具有以下特点：

1.   具有单一的数字扫描头；

2.   适合做快速深度3D活细胞成像；

3.   在深度3D成像领域，比转盘式共聚焦的分辨率更高；

4.   成像亮度是转盘式共聚焦的16倍；

5.   没有转盘式共聚焦的针孔串扰（pinhole cross-talk）现象；

6.   实时成像分辨率达到170nm（去卷积后）；

7.   更大的FOV：12.7×12.7mm；

8.   具有极快的扫描成像速度：25fps（每秒25帧），2048×2048；

9.   灵敏度极高，量子效率（QE）达到95%；

10.  狭缝针孔选择：50mu:1.2AU@100×或20mu:1.2AU@40×；

11.  低光毒性和光漂白性，适合长时间成像；

12.  电动Bypass模式，可快速在宽场荧光显微镜和NL5之间切换；

13.  紧凑的设计，易于使用；

14.  开放型系统设计：升级您目前已有的显微镜，兼容多类图像处理软件；

15.  灵活的配置：可选择不同生产商的显微镜、相机和激光光源进行配置；

16.  性价比高：改造成本低廉，可利用您已有的显微镜和配件进行改造。

广泛的应用

1、 成像速度快，可研究快速的细胞动态变化，光毒性极弱。应用如：细胞迁移、细胞内/外的传输、细胞信号等。

2、 长时间活细胞成像，光毒性和光漂白性均极弱。应用如：发育生物学、再生生物学、免疫学等。

3、 深度3D成像，NL5适合长时间观察大型的活体组织，而不会遗漏任何细节。应用如：类器官、斑马鱼/小鼠胚胎、水凝胶的3D结构成像，等。

4、 多色高内涵药物筛选：可以快速扫描96孔板，并快速确定感兴趣的孔。

快速细胞动态变化的NL5成像

NL5成像速度快，可研究快速的细胞动态变化，光毒性极弱。在生物学领域，一些生物过程发生的非常迅速，如细胞-蛋白动态作用、细胞-细胞相互作用，所以需要快速的扫描速度。应用如：细胞迁移、细胞内/外的传输、细胞信号等。即使信号微弱，也可以对动态的结构进行成像分析。

Hela细胞的快速3D成像：胞质GFP，动态录像显示其结构快速运动。

小鼠肠道肿瘤类器官NL5成像

小鼠肠道肿瘤类器官长时间成像

长时间活细胞NL5成像

NL5可做长时间活细胞成像，光毒性和光漂白性均极弱。应用如：发育生物学、再生生物学、免疫学等，可以进行长达1天多的共聚焦成像，而不产生光毒性。

斑马鱼胚胎长时间成像：脉管系统的形成（24hr），内皮细胞标记内源性GFP。

深度三维NL5成像

NL5可做深度3D成像，适合长时间观察大型的活体组织，而不会遗漏任何细节。应用如：类器官、斑马鱼/小鼠胚胎、水凝胶的3D结构成像，等。

NL5、NL5去卷积和转盘式共聚焦（SDC）在不同深度的3D成像上的对比：样本：团藻，自发荧光，激发光561nm，物镜：100x，NA1.45，油镜。

NL5和转盘式共聚焦在3D成像上的对比（深度60μm），NL5图像更明亮、更清晰。样本：团藻，自发荧光，激发光561nm，物镜：100x，NA1.45，油镜。

NL5和转盘式共聚焦在3D成像上的对比（深度90μm），NL5图像更明亮、更清晰。样本：团藻，自发荧光，激发光561nm，物镜：100x，NA1.45，油镜。

NL5在90μm深度处的成像：

去卷积NL5成像

NL5原始图像和NL5去卷积图像相对比，去卷积后图像分辨率更高，细节更锐利。